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分子生物学论文范文精选

作者:原创论文网 时间:2017-11-24 09:19 加入收藏
  分子生物学作为一门新生的学科,仍然处于成长的初级阶段。学科背景迥异的科学家从各自的知识领域出发,对分子生物学领域的基本问题不断探索,由单一分析转向综合分析,去研究生物的多样性与生命本质的一致性。下面是一篇分子生物学论文,希望你阅读后有收获。
  
  题目:牛病毒性腹泻病毒分子生物学特性研究进展
  
  摘要:牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)是引起牛黏膜病的病原,该病原给养牛业造成重大的损失,致病机理十分复杂。与丙肝病毒同属黄病毒科,二者有很高的同源性,所以被用作HCV的模式病毒。其基因组为一单股正链RNA分子,编码4种结构蛋白和8种非结构蛋白,这些蛋白质在病毒的复制、翻译及与宿主细胞的相互作用中发挥重要作用。随着对该病毒及同属的其他病毒研究的深入,人们对该病毒的致病机制、免疫逃避、遗传特性等方面有了一定的认识。本文综述了该病毒及其同科病毒编码的蛋白质的主要功能,为该病的防治及其他病毒的深入研究提供参考依据。
  
  关键词:牛腹泻病毒;致病机理;RNA病毒;免疫逃避;遗传
  
  牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)是引起牛腹泻病及粘膜病的主要病原,临床症状复杂多样,可表现为亚临床感染,或出现繁殖障碍和由免疫抑制导致的呼吸系统、消化系统性疾病,以及由血小板减少、出血导致的致死性粘膜病。由于BVDV致病机理复杂,并且缺乏有效的防控技术,因此BVDV在世界范围内广泛流行,是造成全球乳/牛业经济损失的重要病原。此外,随着体外受精与胚胎移植在养牛业中的普及和应用,研究人员发现利用感染有BVDV的精液培育出来的胚胎若移植到受体母牛代孕后,受体母牛和新生犊牛均会成为BVDV携带者,这会进一步造成养牛产业的经济损失。近年来,BVDV病毒疫情呈现再次爆发的势头,给畜牧业和人类健康带来了严重危害。
  
  BVDV属黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pes-tivirus),同属的病毒还包括猪瘟病毒(classical swinefever virus, CSFV)及边界病毒(border disease virus,BDV),它们同源性较高,能突破宿主特异性,发生交叉感染。
  
  BVDV是有囊膜的单股正链RNA病毒,仅有一种血清型,不同毒株间存在遗传多样性,及存在大量基因亚型的病毒株。根据病毒基因组5′非翻译区(5′ UTR)序列差异性,将病毒分为I、I I两个基因型,根据能否产生细胞病变,把BVDV毒株分为非致细胞病变型和致细胞病变型。
  
  研究人员通过将属于基因型的不同亚型的病毒株所产生的中和抗体进行了基因亚型之间的交叉保护实验,结果发现基因亚型之间的血清型在一定程度上是可以形成交叉保护力的,但是也有个别基因亚型的中和抗体无法中和其他亚型的感染力,这都为研究人员在建立针对BVDV的疫苗与鉴别诊断提供了很好的实验依据。国内外研究者对BVDV进行了大量研究,阐明了病毒感染等机制,但对该病毒与宿主之间相互影响机制等多方面仍面临许多问题。本文就BVDV分子生物学研究现状进行综述,为进一步研究奠定理论基础。
  
  1   BVDV基因组结构
  
  BVDV为单股正链RNA病毒,基因组全长大约12.5 kb,整个基因组由5′ UTR、一个大的开放阅读框(open reading frame, ORF)、3′非翻译区(3′untranslated region, 3′ UTR)组成。
  
  ORF编码区编码一条长约4 000个氨基酸的多聚蛋白前体多肽链,并由细胞和病毒基因编码的蛋白酶在翻译时和翻译后进行加工,生成成熟的病毒蛋白,它们在基因组上的位置从N端到C端依次为:
  
  NH2-Npro-cap-sid-Erns-E1-E2-P7-NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B-COOH.其中Capsid、Erns、E1和E2为BVDV的结构蛋白,构成BVDV的衣壳和囊膜,其余8种为病毒的非结构蛋白。这些病毒蛋白在子代病毒的产生过程中发挥着重要作用,同时也是诱导机体产生对BVDV侵染的抗病毒天然免疫方面发挥着重要的作用。
  
  1.1  BVDV的5′及3′非翻译区
  
  BVDV 5′ UTR约由380~385个核苷酸组成,通过自身核苷酸序列折叠可以形成由不同茎环组成的特殊二级结构,这种二级结构具有与宿主细胞的翻译起始和延伸相关蛋白质结合互作的功能,从而借助细胞内相关蛋白因子调节BVDV基因组的复制及翻译。
  
  BVDV开放阅读框的翻译不是依赖5′端甲基化帽状结构的翻译起始机制来行使病毒相关基因的翻译,而是由其基因组5′ UTR内部所含有的核糖体内部进入位点(internal ribosome entrysite,  IRES)介导核糖体对翻译起始密码子的识别并激发其下游基因的翻译起始事件。核糖体中的18Sr RNA 3′端的保守序列GUCGAAACAAGG与5′ UTR区IRES的核苷酸互补,通过碱基配对而结合,这样有利于蛋白质的启动翻译。
  
  5′  UTR序列很保守,因此可根据此段序列进行BVDV分型,瘟病毒属5′ UTR区序列的高度同源性和相似的二级结构,说明这一结构在病毒基因组转录、翻译过程中起到重要作用,瘟病毒属病毒可能以相似的机制进行转录和翻译。
  
  BVDV的3′ UTR由223~230个核苷酸组成,属内成员保守性高,无Poly A尾结构。研究表明,黄病毒科3′及5′ UTR参与病毒的基因组的复制、翻译功能,亦与病毒非结构蛋白NS5B同RNA模板链的识别有关。
  
  1.2  BVDV的开放阅读框
  
  BVDV的开放阅读框编码相对分子质量约为450 000的前体多聚蛋白。该前体蛋白进一步由病毒和细胞的酶加工成BVDV核衣壳的核心蛋白C( P 1 4 )、3种囊膜蛋白E 0 ( g p 4 8 )、E 1 ( g p 2 5 )、E 2(gp53),此外还有几种非结构蛋白。结构蛋白与非结构蛋白共同作用,参与病毒复制、传播等过程。
  
  2   BVDV的结构蛋白
  
  2.1核心蛋白P14
  
  核心蛋白P14,也称核衣壳蛋C,位于ORF的第505~810位核苷酸,由102个氨基酸残基组成。
  
  Elashi等构建了p14基因的重组腺病毒,免疫小鼠后,小鼠脾细胞与基因I型和II型BVDV均能产生特异性免疫反应,表明p14蛋白具有免疫原性。研究发现,C蛋白在丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)中,具有转录调控因子的作用,能够抑制基因组中核糖体结合位点的活性,从而抑制病毒复制、翻译过程,降低病毒增殖效率,呈现病毒持续性感染的状态,但C蛋白在瘟病毒属中是否具有同样的功能尚不清楚。
  
  2.2病毒囊膜
  
  蛋白病毒的囊膜由三种糖蛋白组成:
  
  E0、E1、E 2,无论是在感染的宿主细胞还是在病毒粒子上,糖蛋白之间均通过二硫键连接,形成异源二聚体,这种结构对于病毒粒子的组装非常重要,这些异源二聚体构成病毒的囊膜结构。
  
  2.2.1囊膜蛋白E0
  
  囊膜蛋白E0又称Erns或gp48,其编码框位于ORF的第811~1 491位氨基酸,由227个氨基酸残基组成,有潜在的8个糖基化位点,相对分子质量约为27 000,不含有锚定肽[7]
  
  .氨基酸序列分析结果表明,在这一蛋白质内存在一高度保守结构域,这暗示了保守结构域在维持E0蛋白正常生理活性方面发挥着重要作用。该蛋白质除了是一种囊膜蛋白外,同时具有核糖核酸酶活性,但该活性在瘟病毒增殖及使机体致病过程中所起的作用尚不明确。
  
  值得注意的是,当BVDV侵染细胞后,E0蛋白可以被过量表达,这一现象表明E0基因可为开发基因工程疫苗以及检测试剂盒提供候选基因。
  
  由于E0产生的中和抗体具有中和BVDV和CSFV感染细胞的能力,这为利用猪瘟疫苗来预防牛感染BVDV提供了可以借鉴的线索。对于CSFV的E0蛋白来说,其表达后可以高效抑制β干扰素的产生,从而实现病毒对免疫反应的逃避。这一生物学活动也可能发生在BVDV的侵染过程中,这有助于实现BVDV对宿主机体的持续性感染。此外,E0蛋白还具有神经毒性及抗蠕虫能力,同时在病毒入侵细胞的过程中,E0也发挥了重要作用,能与细胞表面的膜蛋白相互作用。
  
  E0蛋白还可以通过降解细胞凋亡因子来抑制细胞的凋亡。
  
  2.2.2囊膜蛋白E1
  
  囊膜蛋白E1基因位于ORF的第1 492~2 076位核苷酸,由195个氨基酸残基组成,有3个糖基化位点,相对分子质量约为20 000,氨基酸序列中有两段高度疏水区,推测其为跨膜蛋白,以C端的疏水区锚定在BVDV囊膜蛋白上,E1可能在病毒包装成熟过程中协助E0定位,但这种糖蛋白无法诱导机体产生中和抗体。2.2.4囊膜蛋白E2E2蛋白同样为病毒的囊膜糖蛋白,具有保守的糖基化位点,是BVDV的主要保护性抗原蛋白。
  
  该蛋白由374个氨基酸残基构成,相对分子质量约为42 000.
  
  E2蛋白具有很高的变异率,高变异率为BVDV感染宿主机体后实现持续性感染提供了物质基础,这也是导致传统疫苗无法完全保护的主要原因。该蛋白质有19个Cys残基和5个潜在的糖基化位点,这些位点在不同的毒株中均非常保守。
  
  E2蛋白N端突出于BVDV囊膜表面,富含四个以构象表位为主的抗原决定簇,是病毒的主要抗原区域,也是与宿主细胞识别、吸附的重要部位。此外,在E2蛋白C端有一段以YYEP为核心序列的线性表位,并且包含一个疏水膜锚定区,可以协助E2蛋白锚定在囊膜上。
  
  E 2蛋白一直是国内外学者研究瘟病毒的重点,尤其是对其表达和免疫原性的研究中。在BVDV核酸疫苗的研究过程中,以往的研究都是停留在实验小鼠体内可以产生较高的抗体水平,但是在自然宿主体内产生抗体水平的能力受到了很大的限制。鉴于这种情况,研究人员利用在天然免疫中发挥重要作用的RIG-I受体基因与E2基因在动物体内共表达,从而明显提高了基因工程疫苗在自然宿主体内诱导高水平抗体的产生。在亚单位疫苗的研究中,利用昆虫细胞表达系统来进行的研究成果逐渐受到疫苗学家的关注。
  
  Pecora等依托昆虫细胞表达系统实现了针对BVDV基因型1和2的E2蛋白的单链抗体的表达,并且发现犊牛和豚鼠均能产生很好的抗体水平,并且分别利用两种基因型的病毒对犊牛进行攻毒后,均有良好的保护效果。
  
  Fu等证实CP型BVDV能引起细胞的自噬,且在此过程中,细胞中病毒囊膜蛋白E0及E2表达量显着上升,推测这两种蛋白质可能参与了诱发细胞自噬的过程。硫氧还蛋白(Trx2)是真核细胞中线粒体呼吸链上的关键蛋白质,参与细胞多项生理过程,Trx2与E2蛋白的互作已被GSTpulldown、激光共聚焦等实验证实,通过RNA干扰实验沉默PK细胞中的Trx2基因后,明显促进了病毒的增殖,此外,Trx2通过促进P65亚基NF-κB向细胞核的转位,增强NF-κB启动子活性,而由肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导的NF-κB信号通路的激活则抑制了病毒的复制。
  
  3   BVDV的非结构蛋白
  
  瘟病毒属病毒的结构蛋白的生物学功能已经研究得比较透彻,而非结构蛋白功能的研究相对较少。近年来研究结果表明,非结构蛋白在病毒复制、宿主细胞功能调节及致病性方面有非常重要的作用,对这些功能的深入研究也为BVDV新型疫苗及靶标药物的研发提供了理论依据。
  
  3.1非结构蛋白Npro
  
  Npro是由168个氨基酸残基组成,相对分子质量为23 000.
  
  Npro是BVDV ORF编码的第一多聚蛋白,具有自身蛋白水解酶活性,能催化自身从正在翻译的多聚蛋白的第168位氨基酸残基(Cys)和第169位氨基酸残基(Ser)构成的裂解位点处裂解下来,成为病毒复制过程中第一个具有生物学活性的病毒蛋白产物。此外,Npro的蛋白酶活性随着自身从多聚蛋白上的解离,其蛋白水解酶活性丧失。通过瘟病毒属成员氨基酸序列比对发现,Npro的同源性较高,其中E22-H29-C69基序高度保守,构成了酶学活性中心。
  
  通过对Npro蛋白结构的研究发现,H29-C69构成了酶的催化中心,而E22位于酶催化中心之外,不参与酶催化反应。
  
  Npro裂解位点位于C168-S169,并且这一裂解位点基序在所有瘟病毒属成员中均十分保守。这暗示了瘟病毒属不同种类病毒的Npro蛋白在生物学功能上具有一定的相似性。
  
  Npro对于病毒的复制不是必需的,但在病毒的增殖及病毒抗宿主天然免疫方面起着重要的作用。进一步研究表明,瘟病毒属病毒Npro可以诱导细胞内蛋白酶降解干扰素调节因子3,从而阻止干扰素刺激基因的转录活化。此外,BVDV感染细胞后,Npro与抗凋亡蛋白结合后抑制感染细胞发生凋亡,这在一定程度上提高了病毒增殖的效率。
  
  3.2非结构蛋白P7
  
  P7蛋白位于E2蛋白与NS2蛋白之间,是由疏水氨基酸构成的一个小分子蛋白肽,这种蛋白小肽并非病毒粒子的主要结构组分。
  
  P7蛋白在多聚蛋白中的位置是结构蛋白和非结构蛋白承上启下的接头,而P7的产生是由宿主信号肽酶介导。体外实验证明,P7可以在脂质双分子层膜上形成通道蛋白且具有离子通道的活性。
  
  P7蛋白能调节细胞膜的通透性,从而协助病毒进入宿主细胞及后期病毒的组装释放。虽然P7蛋白不参与病毒的复制过程,但是在病毒的侵染性及病毒侵染性颗粒形成中发挥重要作用。如果利用离子通道阻断剂来处理受感染细胞,则通过抑制P7蛋白作为离子通道的生物活性来干扰子代病毒的释放。
  
  3.3非结构蛋白NS2和NS3
  
  根据BVDV可否使宿主细胞产生病变效应,可分为两种生物表型,即致细胞病变型(CP)及非细胞病变型(NCP)。
  
  NS2-3融合蛋白是否可以顺利裂解产生单体NS2和NS3是决定BVDV生物表型的重要因素。在CP型病毒感染的细胞中,能同时观察到NS2-3及NS3两种蛋白,而在NCP病毒感染的细胞中,只能观察到NS2-3融合蛋白存在。
  
  CP型及NCP型在BVDV过程中都发挥着重要作用,都是粘膜病发生的主要原因。二者在抗原性上非常接近,NCP型可以向CP型转化,导致这一现象发生的原因可能是:病毒基因组RNA与宿主细胞RNA的重组,病毒RNA自身的复制、重排、缺失、替换以及重组替换等。研究表明,NS2蛋白不参与瘟病毒的复制过程,但该蛋白有一个保守的富含Cys的区域,可形成锌指样的结构,其后还有一段保守的螺旋区,类似的结构大多存在于具有基因表达调控功能的蛋白中,所以推测NS2可能与病毒基因组结合来调控病毒基因的表达。
  
  NS2其他的生物学功能尚待进一步研究。非结构蛋白NS3由683个氨基酸残基组成,该蛋白质含有三种酶学活性,N端1/3处含有一个丝氨酸蛋白酶位点,参与负责病毒多聚蛋白的翻译后加工,产生成熟的病毒蛋白,如下游非结构蛋白NS3-NS4A、NS4A-NS4B、NS4B-NS5A的水解。
  
  NS3的丝氨酸蛋白酶活性中心由N端三个不连续的氨基酸残基(His、Asp、Ser)组成,但其活性依赖完整的蛋白结构。
  
  NS3蛋白C端含有一个RNA解旋酶的结构域,主要通过介导RNA解链来参与病毒的复制及翻译。此外,NS3蛋白还具有与解旋酶活性相关的,依赖RNA的核苷三磷酸酶活性。
  
  这三种酶都参与病毒非结构多聚蛋白的翻译后加工、成熟及基因组复制过与转录过程。研究表明,黄病毒科病毒NS3蛋白具有多种蛋白酶活性,参与病毒基因组复制、转录、翻译等多个阶段,但是其自身不能独立发挥作用,往往需要其邻近非结构蛋白作为辅因子参与蛋白质水解活性的激活,如丙型肝炎病毒属和瘟病毒属中丝氨酸蛋白酶的辅因子为NS4A.
  
  Pang等通过酵母双杂交及免疫共沉淀系统证明HCV NS3蛋白可以与NS4A、NS5A、NS5B形成一个多蛋白复合体,在病毒的复制过程中发挥重要作用。此外,NS3蛋白还有调节病毒IRES元件介导的病毒基因的翻译过程,黄病毒科病毒5′UTR包含一个内部核糖体进入位点(IRES)元件,该位点具有起始病毒基因翻译的功能,在病毒基因组及细胞的某些蛋白的复制翻译过程中起到重要作用。
  
  HCV及CSFV NS3蛋白作为IRES元件的反式作用因子,参与正向调解IRES元件介导的病毒基因的翻译过程[18].
  
  BVDV非结构蛋白NS3不仅在病毒基因复制和多聚蛋白的加工过程中具有重要作用,而且在病毒抗宿主免疫应答及宿主细胞相互作用中也扮演十分重要的角色。经自然感染或者弱毒苗免疫后,动物体内均可检测出针对该蛋白的抗体。
  
  同时该蛋白质是一种免疫优势蛋白,检测NS3蛋白抗体水平可以作为检测BVDV的有效指标之一。
  
  研究发现,鞘氨醇激酶1(Sphk1)是细胞中一种重要的脂酶,它催化鞘氨醇产生的鞘氨1-磷酸(SIP)与细胞的生存、增殖、肿瘤发生、炎症、免疫等功能相关,BVDV NS3蛋白可以结合并抑制Sphk1的催化活性,从而增强病毒的复制,而过量表达Sphk1能明显减弱病毒导致的细胞的凋亡发生。
  
  CP型BVDV感染细胞后通过凋亡途径引起细胞产生病变效应,细胞凋亡的过程与胞内病毒RNA的大量复制、多聚ADP核糖聚合酶(PARP)的裂解、氧化应激、天冬氨酸蛋白水解酶12(Caspase12)相关的内质网应激以及线粒体依赖的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase9)有关。
  
  Gamlen等通过体外构建NS3/4A的几种突变体并转染MDBK细胞发现,野生型的NS3/4A、保留NS3蛋白酶活性的突变体均可以引起细胞凋亡,然而缺失其蛋白酶活性的突变体不能引起MDBK细胞的凋亡,证明NS3可以引起细胞凋亡,并且NS3蛋白酶活性在病毒致细胞病变过程中发挥了决定性作用。史梦婷等研究发现,mi R193a能直接靶向凋亡相关基因Bax,并能抑制Bax的转录水平和蛋白质水平,进而促进凋亡的发生。
  
  3.4非结构蛋白NS4A与NS4B
  
  BVDV非结构蛋白NS4A由64个氨基酸残基组成,其N端多疏水氨基酸,C端主要由极性氨基酸构成,该蛋白质在瘟病毒中高度保守。
  
  NS4A在多聚蛋白产生后,由NS3蛋白酶水解成熟。
  
  HCV的非结构蛋白NS4A作为NS3蛋白酶的辅酶,在病毒复制及多聚蛋白翻译后加工过程中具有十分重要的作用。通过对NS3及NS4A蛋白结构的分析,NS4A通过中央疏水区序列与NS3的N端结合,形成稳定的NS3-NS4A复合物,这样使得NS3蛋白的结构更稳定同时显着提高了NS3的水解效率。二者共同参与切割NS3-NS4A、NS4A-NS4B、NS4B-N S 5 A、N S 5 A - N S 5 B,产生成熟的非结构蛋白NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B.
  
  HCV不同亚型的病毒NS4A都可以作为辅酶参与调解NS3的酶解作用,推测NS4A在其他瘟病毒属中具有相同的作用。此外,HCV的非结构蛋白NS4A与病毒衣壳蛋白、NS3和NS4B共同参与病毒对干扰素及病毒唑的抵抗作用。在病毒颗粒组装的过程中,NS4A与NS2、NS3形成的酶复合体在病毒粒子装配过程中发挥重要作用。
  
  NS4B由347个氨基酸残基组成,其内部含有多个疏水结构域,由此推测NS4B是一个膜蛋白。
  
  NS4B通过锚定在内质网上发挥致细胞病变效应。
  
  通过对NS4B拓扑结构分析后发现,NS4B的功能是严格受到其蛋白质结构正确性的影响。当其自身氨基酸发生突变导致蛋白质高级构象发生改变的时候,变构的NS4B蛋白无法与其他病毒蛋白或者细胞蛋白质互作来指导病毒的自我复制。
  
  3.5非结构蛋白NS5A和NS5B
  
  NS5A由497个氨基酸残基构成,是一种磷酸化酶,可以与多种宿主细胞蛋白作用同时也是病毒复制子的重要组份。
  
  NS5A定位于内质网,可以结合到病毒IRES元件上并下调IRES介导的病毒基因翻译过程。此外,NS5A还可以结合到病毒5′UTR并与3′ UTR互作诱发氧化应激,从而调节病毒基因组的复制。在NS5A与宿主体蛋白的互作研究方面,NS5A通过阻止κB激酶抑制物的磷酸化来调节NF-κB的活性,从而控制病毒对宿主的致病性。研究人员通过分析BVDV在牛骨髓瘤细胞中展现出来致病性的过程发现,巨噬细胞通过降低My D88分子的表达水平来实现单核细胞对病毒感染后细胞因子的高水平表达,而NS5A与My D88分子的互作是BVDV病毒致病性的一个重要层面,后者表达水平的降低使得NS5A在毒力调控方面失去了调控作用。
  
  已有研究表明,大多数病毒(尤其是正链RNA病毒)生活周期的完成很大程度上依赖于细胞蛋白合成机制。热休克蛋白(HSP70)是真核细胞中高度保守的一个蛋白家族,这也正说明了其对细胞起到多种作用,例如参与新和成蛋白的折叠、折叠错误蛋白的修饰、细胞器的迁移、分泌型蛋白的穿膜以及抗病毒感染等。免疫共沉淀与GST-pull-down分析表明,HSP70与NS5A互作,激光共聚焦观察发现二者共定位于细胞的内质网中参与病毒复制的负调控。但是,NS5A蛋白如何参与病毒粒子形成及对大多数宿主细胞蛋白质的作用机制尚待进一步研究。
  
  NS5B编码基因位于病毒基因组的3′末端,该蛋白质在黄病毒科所有成员中均具有依赖RNA的RNA聚合酶(Rd Rp)活性。与大多数RNA病毒所具有的RNA聚合酶一样,BVDV所在的瘟病毒属成员的NS5B蛋白同样在其酶学活性中性周围存在着类似“人右手的手掌以及手指将酶学活性中心抓握在中间的结构”.对于所有RNA病毒的RNA聚合酶具有7处高度保守的氨基酸残基位点,虽然这7处氨基酸残基位点在不同种类的病毒之间存在一点差异,但是它们对应在蛋白酶空间结构上是具有高度的结构保守性。丝氨酸在NS5B的保守结构域中是十分特殊的一类极性氨基酸,当利用一些核酸模拟物来对病毒进行刺激后,其NS5B保守的丝氨酸位点偶尔会被苏氨酸替换,这样有助于病毒产生耐药性。
  
  目前,对于NS5B蛋白晶体结构的研究还只是在登革热病毒和日本乙型脑炎病毒上有所报道,但是鉴于不同RNA病毒的RNA依赖性RNA聚合酶之间的高度保守性,我们可以借助现有的蛋白晶体分析的结果发现,在NS5B蛋白结构中存在着保守的NTP/NTP模拟结构和一些小分子阻断剂的靶位点,这都为研究BVDV的NS5B药物靶点提供了值得参考的实验依据。
  
  近年来,研究者对黄病毒科病毒的感染、基因的复制翻译、病毒感染导致细胞凋亡及自噬等机制研究取得了很多大的进步,然而也仅限于对HCV及CSFV的研究。虽然,有学者利用转录组学技术对BVDV侵染模式细胞(MDBK)后,分析了感染细胞内部基因转录水平的变化并且发现了一些与细胞分化、发育和代谢相关的功能基因的转录水平发生了变化,但是BVDV相关方面还并不十分清楚,甚至处于空白阶段,如BVDV的非结构蛋白如何参与调解调节病毒基因的复制翻译及细胞蛋白与病毒蛋白互作等机制仍有待阐明。另外,非结构蛋白在病毒致病性中发挥重要作用的机制也不清楚,而要阐明以上问题必须将病毒非结构蛋白的结构及功能研究清楚。通过对参与病毒基因转录翻译调控的病毒蛋白及宿主重要蛋白结构及功能的深入研究,进一步阐明非结构蛋白在对抗宿主细胞中的作用机理,为该病的预防及控制提供可靠的参考依据。
 
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